Alle humanen permanenten Tumor-Zelllinien der CLS Zellbank sind mittels DNA profiling (STR-Analyse) authentifiziert.
Die tierischen Zelllinien der CLS Zellbank sind mittels spezies-spezifischer Real-Time PCR auf ihre Spezieszugehörigkeit getestet.
Mykoplasmen-spezifische PCR; zell-basierter assay Plasmotest; DAPI Fluoreszenz Test; STR Analyse; Spezies- spezifische Real-Time PCR.
Zunächst das Wasserbad auf 37°C bringen. Das Röhrchen mit den tiefgefrorenen Zellen aus dem Stickstofftank nehmen und auf Trockeneis ins Labor transportieren. Das Röhrchen mittels einer Pinzette im Wasserbad schnell auftauen, die Probe sollte nicht komplett aufgetaut sein, sondern noch einen kleinen Klumpen Eis haben. Das Röhrchen von außen mit 80%igem Ethanol desinfizieren. Alle weiteren Schritte müssen unter einer sterilen Werkbank durchgeführt werden.
Zum Ablösen der adhärent wachsenden Zellen verwendet CLS in der Regel Accutase, in einigen Fällen TrypLE Express oder Trypsin.
HepG2 Zellen zählen zu langsam proliferierenden Zelllinien und können maximal einmal je Woche subkultiviert werden. Nach dem Auftauen und ebenso nach Passagieren sollte man die Zellen ca. 48 Stunden im Inkubator belassen, damit sie gut adhärieren.
Die Angaben zu Zentrifugationsbedingungen in Versuchsbeschreibungen variieren. Sie werden z.T. in RPM (revolutions per minute), RCF (relative centrifugation force) oder G-Zahl (Gravity) angegeben. Es ist zu beachten, dass Zentrifugationsgeschwindigkeiten, die in RPM angegeben sind, nur bei gleichbleibendem Radius des Rotors konstant sind. Die auf die Partikel in der Versuchsanordnung wirkende Zentrifugalkraft hängt von der Größe der Zentrifuge und somit vom Radius des Rotors ab. Sie ist eine Funktion der Rotationsgeschwindigkeit und dem Radius des Rotors. RPM Angaben können deshalb nur auf andere Zentrifugen übertragen werden, wenn die Rotoren den gleichen Durchmesser haben. Die folgende Gleichung gibt die Umrechnung der RCF oder G-Zahl in RPM an: RCF or G-force = 1.12 x R x (RPM/1000)2, mit R = Radius des Rotors, gemessen in Millimeter. R wird gemessen von der Mitte des Rotors bis zum oberen (Rmin), mittleren (Rav) oder unteren Bereich (Rmax) des Zentrifugenröhrchens, je nachdem an welcher Stelle sich die aufzukonzentrierenden Partikel sammeln sollen. Beispielsweise wird bei einer Pelletierung bis zum Boden des Zentrifugenröhrchens gemessen. Bei Ausschwingrotoren erfolgt die Messung des Radius am horizontal gehaltenen Zentrifugengefäß.
MWt EDTA: 292,24 g/mol. Eine 1M Lösung enthält 292,24 g EDTA in 1l Lösungsmittel. Eine 0.05%ige Lösung an EDTA enthält 0.05g in 100g Lösungsmittel. 0.05g EDTA = 1.711x10-4 mol. Gelöst in 100g Lösungsmittel ist diese Lösung 1.711x10-3M (ausgehend von Wasser als Lösungsmittel). Um eine 1.711x10-3 M Lösung herzustellen, muss die 5.0M Lösung über 2,922.26 verdünnt werden, also z.B. 1 ml in 2.922,26ml.
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Die Sicherheitsdatenblätter (MSDS) finden Sie bei dem jeweiligen Produkt als PDF-file unter Produktinformationen/Downloads.
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Wir empfehlen, die Zellen nach Erhalt auf Trockeneis nur vorübergehend (max.1 Tag) bei -80°C zwischenzulagern, und schnellstmöglich zu kultivieren. Sollte dies nicht möglich sein, müssen die Zellen bei Temperaturen unterhalb -150°C gelagert werden. Die Qualität der permanenten Zelllinien sollte innerhalb von 3 Monaten nach Erhalt überprüft werden. Vorgehen: 1. Die Zellen auftauen. 12. Zellviabilität ermitteln 13. Kultivieren 14. Eigenen Masterstock anlegen.
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